動物基因組DNA提取試劑盒 NobleRyder D0922
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動物基因組DNA提取試劑盒 NobleRyder D0922
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動物基因組DNA提取試劑盒
試劑盒組成 | 50T | 200T | 保存溫度 |
RNaseA(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
蛋白酶K(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
裂解液 | 12.5ml | 50ml | RT |
結合液 | 25ml | 100ml | RT |
玻璃奶 | 2.5 | 10ml | RT |
TE緩沖液 | 10ml | 30ml | RT |
原理簡介
本試劑盒適用于動物組織及培養(yǎng)的細胞樣本,用于從中提取基因組DNA。對于尾,骨等可用,但提取效果一般。*的裂解緩沖液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物質,并利用玻璃奶吸附DNA,進一步的去掉其他雜質,提取出來,得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游應用實驗。
注意事項
1.裂解液低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在熱水中溫浴幾分鐘幫助重新溶解,恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā)、氧化、pH值變化,各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。
3.RNaseA經常使用可放2-8度保存,蛋白酶K請放-20度保存。
4.同一樣本,如果想大量提取,可以增加樣本量,并且每一步試劑加量,但使用次數會成倍減少。
操作步驟
1.取不超過108個細胞),12,000rpm,離心30秒,盡可能的吸凈上清。如果是組織,可用液氮研磨或者盡可能的剪碎,取不超過20mg,放入離心管中。
2.加入250ul裂解液,立即震蕩混勻,可選做步驟:如需要去除RNA,可以加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液,振蕩混勻,室溫放置5-10分鐘。
3.加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液,顛倒混勻,65℃放置10-30分鐘,期間顛倒3-5次,小心內心管蓋受熱開啟。如30分鐘沉淀無法*消失,請注意第6步處理。
4,在上清中加入三倍體積無水乙醇,充分混勻。
5.12000rpm離心5分鐘,吸去上清,核酸在沉淀中。
6.沉淀中加入500ul結合液,65℃水浴1-2分鐘,核酸沉淀可溶解(如無法*溶解,可轉移上清到一新的離心管中,棄沉淀)。
6.玻璃奶搖勻。加入50ul搖勻的玻璃奶,混勻,室溫放置2分鐘,10000轉/分鐘離心1分鐘,去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振蕩混勻,10000轉/分鐘離心1分鐘,去上清,70%乙醇重復洗一次,再用無水乙醇洗一次。去上清,再次離心2分鐘,用小吸頭吸去上清。
7.室溫放置10分鐘(如果玻璃奶加量,請適當延長放置時間,此步為去除殘余酒精,以免影響下游實驗),加入50-100ul TE緩沖液混勻溶解,65℃水浴5分鐘。離心,取上清為所提基因組。
8.電泳或者其他方法檢測,進入下游實驗。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學試劑、實驗耗材及實驗儀器研發(fā)、銷售、服務為一體的生物科技公司,公司主要經營的進口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas(MBI), NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;產品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關試劑、細胞培養(yǎng)及檢測常用試劑、實驗室常用耗材及儀器。