BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 NobleRyder P0030
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 NobleRyder P0030量大優(yōu)惠，咨詢 ：
BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 NobleRyder P0030
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BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明
試劑盒組成 包裝（500微孔） 保存
BCA試劑 100ml 2-8℃
Cu試劑 3ml 2-8℃
PBS稀釋液 30ml 2-8℃
BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn) （5mg/ml BSA） 1ml -20℃
本試劑盒自訂購(gòu)之日起一年內(nèi)有效。本試劑盒用于酶標(biāo)板或者200ul比色皿時(shí)可做500孔。當(dāng)使用2ml比色皿時(shí)可做50孔，如果是1ml比色皿時(shí)可做100孔。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測(cè)定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測(cè)結(jié)果，但受螯合劑（EDTA，EGTA）、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類(lèi)的影響。實(shí)驗(yàn)中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
使用說(shuō)明
一，微孔酶標(biāo)儀法
1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻（混合時(shí)可能會(huì)有渾濁，但混勻后就會(huì)消失）。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10微升BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100微升（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加PBS補(bǔ)足到20微升。
3. 將樣品作適當(dāng)稀釋（多做幾個(gè)梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時(shí)的誤差，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。
4. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分鐘。用酶標(biāo)儀測(cè)定A562nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時(shí)，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。
二，分光光度計(jì)法、
如沒(méi)有酶標(biāo)儀，可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色。
步驟如下：
1．配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻（混合時(shí)可能會(huì)有渾濁，但混勻后就會(huì)消失）。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2， 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取100微升BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至1ml（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。
3， 取八支（或者更多）5ml離心管，標(biāo)讓號(hào)，按下表加入試劑。
離心管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7（樣品管1） 8（樣品管2） 9（樣品管3）
標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA 0 40ul 80ul 120ul 160ul 200ul 200ul適當(dāng)稀釋的樣品1 200ul適當(dāng)稀釋的樣品2 ……
PBS 200ul 160ul 120ul 80ul 40ul 0 0 0 0
BCA工作液 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
4， 37℃放置15-30分鐘。用分光光度計(jì)測(cè)562nm處吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷(xiāo)售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。
