Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒

本試劑盒自訂購之日起九個(gè)月內(nèi)有效。本試劑盒用于酶標(biāo)板或者200ul比色皿時(shí)可做2500孔。當(dāng)使用2ml比色皿時(shí)可做250孔，如果是1ml比色皿時(shí)可做500孔。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的zui大吸收峰的位置（lmax），由465nm變?yōu)?/span>595nm，在一定的濃度范圍內(nèi)，測(cè)定的吸光度值A595，與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

操作說明：

一，微孔酶標(biāo)儀法

1.        *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取10ml，加240ulPBS稀釋至250ml ，使終濃度為0.2mg/ml。待測(cè)蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

2.        5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻，取1ml  5×G250染色液，加入4ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

3.        將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中，加PBS稀釋液補(bǔ)足到20微升。

4.        將樣品作適當(dāng)稀釋（多做幾個(gè)梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時(shí)的誤差，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。

5.        各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液，室溫放置3-5分鐘。

6.        用酶標(biāo)儀測(cè)定A595，或560-610nm之間的其它波長(zhǎng)的吸光度。

7.        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。

二，分光光度計(jì)法

如沒有酶標(biāo)儀，可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

步驟如下：

1，取八支（或者更多）干凈的10ml離心管，標(biāo)記上號(hào)。

2，取100ulBSA，加PBS2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml。

3，5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻，取10ml  5×G250染色液，加入40ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4，按下表加入試劑(以每孔5ml計(jì)，多余的用來潤洗比色皿)

5，反應(yīng)3分鐘后測(cè)OD值。為了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，可每間隔2分鐘加一管染色液，每間隔2分鐘測(cè)一管OD值。如下表。