1、abcam抗體的保存溫度
對(duì)于許多抗體而言,分裝為小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍存是正好的保存條件。分裝抗體可以大限度減少凍融對(duì)抗體造成的損壞,還可避免多次從同一管中移取抗體而引入污染。分裝后抗體只可凍融一次,如有剩余,應(yīng)保存在 4 ℃ 下。
收到抗體后,請(qǐng)以 10,000 × g 離心 20 秒,沉降滯留在管蓋螺紋中的溶液,然后分裝抗體并將其轉(zhuǎn)移至低蛋白質(zhì)結(jié)合的微量離心管中。分裝抗體的量取決于您在實(shí)驗(yàn)中常用的量。分裝抗體應(yīng)不少于 10 μL;分裝抗體量越少,濃度就越容易受到蒸發(fā)以及儲(chǔ)存樣品管表面吸附的影響。
在大部分情況下,可在收到抗體之后立即將其保存于 4 ℃ 下,可保存 1 至 2 周。遵循數(shù)據(jù)表上的保存建議非常重要。
?2、abcam抗體的存放注意事項(xiàng)
切勿凍存酶偶聯(lián)抗體,而應(yīng)將其保存在 4 ℃ 下。凍融不僅會(huì)影響抗體的結(jié)合能力,還會(huì)降低酶活性。
偶聯(lián)抗體(無(wú)論是偶聯(lián)有熒光染料、酶還是生物素)應(yīng)保存在深色樣品瓶中或用錫箔紙包裹樣品瓶。暴露于光下會(huì)影響偶聯(lián)物的活性。熒光偶聯(lián)物尤其容易發(fā)生光致漂白,因此在實(shí)驗(yàn)各階段都應(yīng)避光保存。
IgG3 同型抗體的*之處在于其解凍后容易形成聚集體,因此應(yīng)始終保存在 4 ℃ 下。
腹水液中可能含有蛋白酶,因此收到后應(yīng)盡快凍存。
?3、abcam抗體防止污染
為了防止微生物污染,可將疊化鈉加入抗體制備物中,疊化鈉的終濃度為 0.02% (w/v)。我們的多款抗體中都含有這種保護(hù)劑,其濃度范圍為 0.02%-0.05%。數(shù)據(jù)表的保存緩沖液部分將對(duì)此進(jìn)行說(shuō)明。
不使用疊化鈉的情況
如果要用抗體對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理,或者要用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究,請(qǐng)務(wù)必使用不含疊化鈉的制備物。這種抗菌劑對(duì)大部分生物體都有毒害作用:它會(huì)阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
疊化鈉會(huì)干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng),因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之前將其去除。完成偶聯(lián)反應(yīng)之后,可使用疊化鈉保存抗體。另一種可用的抗菌劑是 0.01% 硫柳汞鈉(硫柳汞),這種物質(zhì)不含伯胺。
抗體溶液中的疊化鈉可通過(guò)滲析或凝膠過(guò)濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da(IgM 約為 600,000 Da),疊化鈉的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微滲析裝置可使疊化物順利擴(kuò)散出去,而抗體得以保留。
滲析過(guò)程在燒杯中(置于磁力攪拌器上,溫度保持 4 ℃)進(jìn)行,每毫升抗體使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS,攪拌滲析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次,每次更換后均攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能,所有材料都應(yīng)滅菌,并且應(yīng)在無(wú)菌條件下處理所得制備物。